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2023-02-152517 次瀏覽
解決方案|細(xì)胞不貼壁怎么辦?

   貼壁細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞不貼壁

可能原因:胰蛋白酶消化過(guò)度;支原體污染;培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解);細(xì)胞老化;接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。

 

解決方法:縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2;

啟用新的保種細(xì)胞;調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。

 

   懸浮細(xì)胞成簇

可能原因:培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子;支原體污染;蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解;DNA污染。

 

解決方法:用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體;DNasel處理細(xì)胞。

 

   培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

可能原因:由于更換不同培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必須成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;試劑保存不當(dāng);接種細(xì)胞起始濃度太低;細(xì)胞已老化;支原體污染。

 

解決方法:比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子;用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;血清需保存在-10-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;增加接種細(xì)胞起始濃度;換用新的保種細(xì)胞;分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

 

   培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好

可能原因:

?  細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;

細(xì)胞的接種量:接種量過(guò)低,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;

細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng);

胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短:時(shí)間過(guò)長(zhǎng),細(xì)胞死亡;時(shí)間過(guò)短,細(xì)胞未完全分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速溶。

?  污染

支原體污染;

霉菌污染。

?  培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證;

選擇的培養(yǎng)基是否合適;

培養(yǎng)基配制是否合適;

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤。

?  培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常;

        培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

 

解決方法:

     根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,做出針對(duì)性的解決方案

?  注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù),接種量等:

?  避免產(chǎn)生污染(用正規(guī),合法,可朔源的血清);

?  要用合適的血清或培養(yǎng)基,最好經(jīng)過(guò)驗(yàn)證;

?  注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。

 

   培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因:培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2;培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大;細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷;培養(yǎng)液滲透壓不正確;培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。

 

解決方法:檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;取新的保存細(xì)胞種;檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓;換入新鮮培養(yǎng)液。