細胞傳代
大部分來自實體組織器官的細胞是貼壁生長的,它們在機體內(nèi),也是與其他細胞或細胞外基質(zhì)結(jié)合的。
在貼壁的過程中,細胞首先分泌細胞外基質(zhì),這種細胞外基質(zhì)黏附在支持物的表面(如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿的底面)。細胞通過其表面的黏附因子與這些細胞外基質(zhì)結(jié)合。所以細胞貼壁與否與細胞本身分泌細胞外基質(zhì)的能力以及細胞本身表達的黏附分子的數(shù)量有關(guān),也與培養(yǎng)皿壁的表面結(jié)構(gòu)有關(guān)。
大口無碰撞
但細胞將培養(yǎng)瓶底部占滿時,需要采用細胞消化的方法將細胞從細胞培養(yǎng)瓶上剝落,傳代轉(zhuǎn)移到其他培養(yǎng)器皿中繼續(xù)培養(yǎng),此時如何高效收獲細胞,如何提高細胞回收率成為重中之重。總擔心遺漏了角角落落的細胞,或是用力過猛損害細胞健康?總是擔心刮刀蹭到瓶口導致污染?總是害怕移液時撞到瓶子移液不準?不用擔心,耐思來助力!
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傳代密度過高
一旦細胞養(yǎng)太久至融合度過高(>90%)才傳代,容易使細胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細胞時不易吹打成單顆細胞,即便再重新傳代,細胞也無法回到原本的特性。(如:單層細胞,沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)。
解決方案
盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達到80%即可傳代。
細胞融合度:在細胞培養(yǎng)中指的是細胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。
傳代密度過低
貼壁培養(yǎng)的細胞,若細胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細胞密度過低,細胞間距離太遠,就無法在細胞間產(chǎn)生黏附及通信作用,幫助信號傳導并活化細胞;總體細胞量不足,分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境,以上皆會造成增殖速度遲緩或細胞死亡。
解決方案
細胞傳代時,要進行準確的細胞計數(shù),確保接種的密度。
如何確定細胞的正確初始接種密度?
美國細胞庫(ATCC)建議各類不同細胞株接種密度:
來源:
https://www.atcc.org/support/faqs/8e032/Seeding%20Density%20for%20Cell%20Lines-25.aspx